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杏耀娱乐注册分离液(1.131)/Percoll 17089101产品上海联硕杏耀娱乐科技有限公司

金牌供应商

性能参数

产品名称: 杏耀娱乐注册分离液(1.131)/Percoll 17089101产品
产品货号: 17-0891-01
产品规格: 100ml/1L
产品产地: Pharmacia
产品商标: Pharmacia
价    格: 1元
保存与运输: 低温保存
现货状态: 现货
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2018/9/18 14:07:00
浏览人数:89
诚信指数:4719点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海联硕杏耀娱乐科技有限公司
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邮编:
201801
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总机转807分机
联系人:
颜宏
所在区域:
上海·上海
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产品详细描述

现货促销!100ml分装,1L原装 两种包装可选!

Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴杏耀娱乐注册和淋巴母杏耀娱乐注册

  () 原理
  Percoll是一种包有乙***的硅胶颗粒。渗透压很低(<20mosmkg HO), 粘度也很小,可形成高达1.3gml密度,采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(2001000g)于数分至数十分钟内达到满意的杏耀娱乐注册分离结果。由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。此外,Percoll不穿透杏耀娱乐膜,对杏耀娱乐注册无毒害,因此广泛用于分离杏耀娱乐注册、亚杏耀娱乐注册成分、细菌及病毒,还可将受损杏耀娱乐注册及其碎片与完好的活杏耀娱乐注册分离。
  ()操作方法及注意事项
  1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备先用9Percoll18.5 NaCl1.5MPBS混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液(0.85 NaCl0.15M PBS)稀释到所需浓度。
 Percoll浓度()  70    60    50    40    30     20
  比重gml     1.090     1.077     1.067     1.056     1.043       1.031
    2.不连续密度梯度Percoll层的制备先将试管壁用牛血清湿润,除去多余血清,这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下,使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置,有时相邻两层Percoll比重相差不大时,可将Percoll液放入注射器中,小针头斜面紧贴管壁,任其自然慢慢流下。
    3.装样:样品体积和杏耀娱乐注册浓度根据不同杏耀娱乐注册而异,一般加样体积不宜过大,杏耀娱乐注册浓度也不可过高,否则会影响杏耀娱乐注册的分离和回收。
    4
.离心:一般采用离心力为400g,时间2025min。由于多层Percoll之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。
    5.
取样:当所要分离的杏耀娱乐注册绝大部分在两层的界面时,可逐层去除Percoll液后收集界面部位的杏耀娱乐注册;有时大部分杏耀娱乐注册位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的杏耀娱乐注册经2次洗涤后可供培养或检测用。
  ()分离纯化杏耀娱乐注册举例
  1.富含NK活性大颗粒淋巴杏耀娱乐注册(LGL)的纯化:按顺序由下向上逐层加50%、47.5%、45%、42.5%和40%五种不同密度的Percoll,如用10ml试管(或塑料管)分离,每层Percoll1.21.5ml,初步从外周血中分离的PBMC杏耀娱乐注册1×108悬于1ml培基中,按要求装样、离心和取样。一般富含NK杀伤活性的LGL杏耀娱乐注册位于42.5%与45Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。
    2.
纯化淋巴母杏耀娱乐注册和除去死杏耀娱乐注册:分别叠加50%和30Percoll液。收取经PHA(或其它抗原、有丝分裂原)刺激PBMC,或含有较高比例异型的PBMC(如肾综合征出血热患者),按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴杏耀娱乐注册为小淋巴杏耀娱乐注册;两层Percoll之间为淋巴母杏耀娱乐注册,纯度和回收率在80%以上,位于30Percoll表面是死杏耀娱乐注册。收获淋巴母杏耀娱乐注册可进行表型、结构以及功能的研究。
  () 人不同血杏耀娱乐注册的漂浮密度
          表   人不同血杏耀娱乐注册的漂浮密度
   ──────────────┬──────────────────
   细 胞   漂浮密度    │ 细 胞       漂浮密度
   ──────────────┼──────────────────
   红杏耀娱乐注册  1.09-1.11     淋巴杏耀娱乐注册       1.052-1.077
   粒杏耀娱乐注册            │ B淋巴杏耀娱乐注册      1.062-1.075
   嗜酸性  1.09-1.095     │ T淋巴杏耀娱乐注册      1.065-1.077
   嗜中性  1.080-1.085    │ 淋巴母杏耀娱乐注册     1.065-1.077
   单核杏耀娱乐注册 1.050-1.066    自然杀伤杏耀娱乐注册     1.050-1.070
   血小板  1.030-1.060    
   ──────────────┴──────────────────
     (
)问与答 

问:
请问percoll连续梯度怎么配制?比如15%---75%percoll连续梯度?
答:
根据你需要的具体密度梯度决定的,根据要分离的不同杏耀娱乐注册种类,数量等等,也有用原液配的。也有用80%配的,不一定的。另外,percoll本身是低渗透压的,要用高渗透压溶液配成生理等渗透压溶液,然后使用,不然,杏耀娱乐注册容易破裂。一般是先用9Percoll18.5 NaCl1.5MPBS混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液(0.85 NaCl0.15M PBS)稀释到所需浓度。即取Percoll原液与10倍浓缩的PBS91的比例混合,此时溶液 100 Percoll,比重是1.127,毫克分子渗透压浓度为290mOsmol/kg 
Percoll
浓度()  70     60      50      40      30       20 
比重gml      1.090  1.077    1.067   1.056   1.043    1.031


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