钙黄绿素_Calcein,AM常见问题—百萤杏耀娱乐帮您答疑解惑

来源: 西安百萤杏耀娱乐科技有限公司   2019-3-20   访问量:973评论(0)

1.钙黄绿素产品的用途是什么?

答:钙黄绿素是用来标记和监测活杏耀娱乐注册的杏耀娱乐注册功能的一类荧光探针/试 剂盒。它只针对活杏耀娱乐注册进行染色,不能染已固定的杏耀娱乐注册。
注:染色时间不可太久,保持在一天内,一天后,荧光会变得不明显。



2.钙黄绿素中带 AM 与不带 AM 的探针有什么区别?它们的优点是什么?

答:不带 AM 的探针可以直接注射进入杏耀娱乐注册,而带 AM 的探针,因为 AM 具有杏耀娱乐注册膜渗透性,一旦进入杏耀娱乐注册,被杏耀娱乐注册内酯酶水解为钙黄绿素 (Calcein),产生强烈的绿色荧光(Ex/Em= 490nm/515nm)。因不具杏耀娱乐注册膜渗透性,从而能被保留在杏耀娱乐注册内。Calcein Red 和 Calcein Deep Red 两种类似物,使其能够替代 Calcein AM 用在活杏耀娱乐注册的标记和功能分析的多重标记研究。AM 酯是非极性酯,其易于穿过活杏耀娱乐注册膜, 并且通过活杏耀娱乐注册内的杏耀娱乐注册酯酶快速水解。AM 酯广泛用于非侵入性地将 各种极性荧光探针加载到活杏耀娱乐注册中。但是,使用 AM 酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质 量的无水二甲基亚砜(DMSO)。DMSO 储备溶液可以在-20℃下干燥储存 并避光。在这些条件下,AM 酯可以稳定数个月。



3.钙黄绿素的染色过程需要注意哪些问题?

答:杏耀娱乐注册离心,去培养基,清洗杏耀娱乐注册 1~2 次,以充分去除残留的培养基,稀释成工作浓度为 2-5μM (PBS 或 HBSS-HEPES)有时可添加一定量的非离子表面活性剂如 Pluronic F127 到 Calcein Red ™储存液 内来增强其水溶性 37℃ 孵育 20min~1h 用 PBS(或者其他缓冲液)洗 涤杏耀娱乐注册两次去除多余染料
注:1.杏耀娱乐注册活力理想的浓度范围应在 4-5μM
2.如果杏耀娱乐注册中含有有机阴离子转运蛋白,可以在杏耀娱乐注册培养基中加 入丙磺舒(1-2.5 mM)或磺吡酮(0.1-0.25 mM),以减少脱酯化。
3.因为背景高的原因,需要多清洗杏耀娱乐注册几次去除多余染料。



4.钙黄绿素适用于哪些仪器?

答:荧光显微镜、流式杏耀娱乐注册仪
注:使用流式杏耀娱乐注册仪时需要立即分析杏耀娱乐注册样品,以确定在零时间没有 洗涤的每个杏耀娱乐注册的平均荧光。



5.钙黄绿素与其他活杏耀娱乐注册染料相比有何优势?

答:钙黄绿素与其他同类产品(如 CFDA、CFSE 等)相比是特别适合染 活杏耀娱乐注册的荧光探针,因为它的毒性特别低。并且它不会抑制杏耀娱乐注册的各 种功能,如增殖、趋化性等。
注:钙黄绿素和碘化丙啶(PI)常用于鉴别死活杏耀娱乐注册。钙黄绿素的亲脂性很高,可以通过杏耀娱乐注册膜,脱去AM后发生强烈绿色荧光;而碘化丙 啶(PI)不能通过活杏耀娱乐注册的杏耀娱乐注册膜,它仅可以穿过死杏耀娱乐注册膜,嵌入其 DNA 螺旋产生红色荧光。由于钙黄绿素与碘化丙啶在 490nm 处均可被激发,545nm 激发仅可观察死杏耀娱乐注册。因此,他们被用于活杏耀娱乐注册和死杏耀娱乐注册双重染色。



6、钙黄绿素在作为显色剂时如何很好的溶解?

答:钙黄绿素在在 1mol/L 的氢.氧.化.钠溶液中,溶解度能达到 50mg,并且超声助溶不会破坏其结构。



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